Zawartość kursu
Konkurs Kuratoryjny z Biologii — Świętokrzyskie — Etap III (wojewódzki)

Etap III · poszerzenie · genetyka

DNA przechowuje informację genetyczną. Na konkursie liczą się: budowa nukleotydu, reguła komplementarności, różnice między DNA a RNA oraz sposób upakowania DNA w chromosom (helisa → nukleosom → chromatyna → chromosom). Do tego dochodzą replikacja DNA, która poprzedza każdy podział komórki, budowa genu i porównanie genomów bakterii, eukariontów i wirusów.

Nukleotydy — cegiełki kwasów nukleinowych

Nukleotydy to niewielkie cząsteczki organiczne zbudowane z pięciu pierwiastków: C, H, O, N i P. W komórce występują jako wolne nukleotydy. Mogą też łączyć się w dinukleotydy albo w długie polinukleotydy, czyli kwasy nukleinowe.

Element nukleotyduCo to jest
Pentozacukier pięciowęglowy: ryboza (RNA) albo deoksyryboza (DNA)
Zasada azotowajedna z pięciu: G, A, C, T, U. Puryny mają dwa pierścienie (adenina, guanina). Pirymidyny mają jeden pierścień (cytozyna, tymina, uracyl).
Reszty fosforanowe(V)od jednej do trzech. W fizjologicznym pH komórki występują jako aniony.

Dwa wiązania wewnątrz nukleotydu: pentoza + zasada → wiązanie N-glikozydowe → powstaje nukleozyd. Następnie nukleozyd + reszta fosforanowa(V) → wiązanie estrowe → powstaje nukleotyd.

Atomy węgla cukru numeruje się ze znakiem prim (1′–5′). Dzięki temu nie myli się ich z atomami węgla zasady. Nazwy nukleotydów DNA tworzy się od nukleozydów: deoksyadenozyny, deoksyguanozyny, deoksycytydyny i tymidyny. Wzór nazwy to „nukleozydo-5′-monofosforan”. Liczba 5′ oznacza, że fosforan jest przyłączony do piątego węgla deoksyrybozy.

PodziałGrupy
wg cukru i zasadyrybonukleotydy: ryboza + G, A, C lub U; skróty trzyliterowe, np. ATP (adenozynotrifosforan).
deoksyrybonukleotydy: deoksyryboza + G, A, C lub T; skróty czteroliterowe, np. dATP (deoksyadenozynotrifosforan).
wg liczby fosforanówtrifosforany, difosforany i monofosforany nukleozydów, np. ATP ↔ ADP + Pi ↔ AMP + Pi. Przechodzą w siebie przez przyłączanie lub odłączanie reszt fosforanowych. Część nukleotydów tworzy formy cykliczne (pierścieniowe).

Funkcje wolnych nukleotydów (m.in.):

  • przenoszą energię chemiczną (ATP);
  • działają jako cząsteczki sygnałowe (cykliczny AMP, cAMP);
  • są substratami do syntezy dinukleotydów i kwasów nukleinowych.

Dinukleotydy składają się z dwóch nukleotydów i przenoszą elektrony w metabolizmie:

  • NAD+ — jeden z nukleotydów zawiera pochodną kwasu nikotynowego (witaminy B3);
  • NADP+ — ma wszystko to co NAD+ oraz dodatkową resztę fosforanową(V);
  • FAD — jeden z nukleotydów jest pochodną ryboflawiny (witaminy B2).

Budowa DNA

DNA to zwykle dwuniciowa cząsteczka (podwójna helisa) zbudowana z nukleotydów. Każdy nukleotyd = cukier (deoksyryboza) + reszta fosforanowa + zasada azotowa. Zasady: adenina (A), tymina (T), guanina (G), cytozyna (C). Wyjątek: u niektórych wirusów występuje DNA jednoniciowe (ssDNA).

Reguła komplementarności: nici łączą się zasadami według zasady A–T i G–C (wiązania wodorowe). Znając jedną nić, można odtworzyć drugą. Nici są antyrównoległe.

Łańcuch (nić) polinukleotydowy. Kolejne nukleotydy łączą się wiązaniami 3′,5′-fosfodiestrowymi. Reszta fosforanowa(V) spina węgiel 3′ cukru jednego nukleotydu z węglem 5′ cukru następnego — stąd nazwa wiązania. Nić jest polarna, bo jej dwa końce mają różną budowę:

  • koniec 5′ — reszta fosforanowa(V);
  • koniec 3′ — grupa hydroksylowa (–OH) cukru.

Sekwencja to kolejność nukleotydów w nici. Zapisuje się ją literami zasad, zaczynając od końca 5′, np. 5′-ATCGT-3′ albo krótko ATCGT. W RNA zapis wygląda analogicznie, np. 5′-AUCGU-3′.

Przestrzenny kształt helisy:

  • Helisa jest prawoskrętna, a dwie nici skręcają się wokół wspólnej osi.
  • Na zewnątrz leży szkielet cukrowo-fosforanowy (deoksyryboza + reszty fosforanowe). Zasady są skierowane do środka.
  • Dwie zasady związane wiązaniami wodorowymi tworzą parę zasad. Naprzeciw puryny (A lub G) zawsze stoi pirymidyna (T lub C), dzięki czemu helisa ma stałą średnicę.
  • Helisę stabilizują wiązania wodorowe między niciami. Dodatkowo działają oddziaływania hydrofobowe między sąsiadującymi parami zasad w tym samym łańcuchu.
  • Na jeden pełny skręt przypada 10 par nukleotydów.
  • Wzdłuż helisy biegną dwa rowki, większy i mniejszy. Dzięki nim białka wiążące DNA rozpoznają sekwencję bez rozplatania helisy.
  • Długość dwuniciowego DNA podaje się w parach zasad (pz), czyli w liczbie par nukleotydów.

Antyrównoległość w zapisie: koniec 5′ jednej nici leży naprzeciw końca 3′ drugiej. Dla nici 5′AATGCGT3′ nić komplementarna to 3′TTACGCA5′.

Schemat podwójnej helisy DNA: dwie zielone nici szkieletu cukrowo-fosforanowego i kolorowe pary zasad połączone wiązaniami wodorowymi.
Podwójna helisa DNA. Zielone wstęgi to szkielet cukrowo-fosforanowy: na przemian cukier (pięciokąt) i reszta fosforanowa (kółko). Między nićmi leżą pary zasad połączone wiązaniami wodorowymi (kreski): para A–T ma dwa takie wiązania, para G–C — trzy. U góry jedna nić kończy się resztą fosforanową (koniec 5′), a druga cukrem (koniec 3′), bo nici biegną w przeciwnych kierunkach — są antyrównoległe.

Jak poznano strukturę. DNA odkryto w 1869 r. Jego przestrzenną budowę ustalili dopiero w 1953 r. James Watson i Francis Crick. Sami nie robili doświadczeń laboratoryjnych nad DNA — oparli się na wynikach innych badaczy. Kluczowe okazały się zdjęcia rentgenowskie kryształów DNA wykonane przez Rosalind Franklin z zespołu Maurice'a Wilkinsa. Ciemne plamy ułożone w środku zdjęcia w kształt litery X wskazywały, że DNA jest helisą.

DNA a RNA

CechaDNARNA
Nicizwykle dwie (helisa); ssDNA u niektórych wirusówzwykle jedna; mogą wystąpić fragmenty dwuniciowe w obrębie tej samej nici; całe dwuniciowe RNA (dsRNA) — znacznie rzadziej, m.in. u niektórych wirusów
Cukierdeoksyrybozaryboza
ZasadyA, T, G, CA, U, G, C (uracyl zamiast tyminy); pary: A–U, G–C
Rodzaje nukleotydów4 deoksyrybonukleotydy (A, T, G, C)4 rybonukleotydy: adeninowy, guaninowy, cytydynowy, urydynowy
Funkcjaprzechowywanie informacji; materiał genetyczny wszystkich organizmów i części wirusówudział w syntezie białka (mRNA, tRNA, rRNA); część cząsteczek działa katalitycznie (rybozymy) lub regulacyjnie; materiał genetyczny pozostałych wirusów i wiroidów
Stabilnośćtrwalszy jako materiał genetycznymniej stabilny: przy kopiowaniu powstaje więcej błędów i łatwiej ulega degradacji

Rola DNA i doświadczenia, które ją wykazały

DNA wyznacza strukturę pierwszorzędową cząsteczek RNA i białek. Od białek zależą cechy organizmu: morfologiczne, anatomiczne i fizjologiczne. Cechy te przechodzą z pokolenia na pokolenie, więc DNA jest nośnikiem informacji genetycznej odpowiedzialnym za dziedziczenie. Ustalono to w połowie XX w. dzięki badaniom bakterii i wirusów.

BadanieCo zrobiono i co wyszło
Frederick Griffith, 1928Brytyjski lekarz wojskowy leczący bakteryjne zapalenie płuc. Badał na myszach dwa szczepy dwoinki zapalenia płuc. Szczep S jest chorobotwórczy i ma śluzową otoczkę. Szczep R jest niechorobotwórczy i otoczki nie wytwarza.
Próby i wyniki:
• żywe S → mysz choruje i ginie;
• żywe R → mysz zdrowa;
• S zabite wysoką temperaturą → mysz zdrowa;
• żywe R + martwe S → mysz ginie, a z jej ciała wyizolowano żywe bakterie S.
Wniosek: bakterie chorobotwórcze potrafią przekazać niechorobotwórczym zdolność zakażania. Griffith nie wiedział, jaki związek za to odpowiada — tylko tyle, że jest to składnik cytoplazmy bakterii chorobotwórczych.
Oswald Avery, Colin MacLeod, Maclyn McCarty, 1944, USAKontynuacja prac Griffitha. Problem: białko, RNA czy DNA? Hipoteza: DNA.
Do ekstraktu z bakterii chorobotwórczych dodawano jeden z enzymów: proteazy (trawią białka), deoksyrybonukleazy (DNA) lub rybonukleazy (RNA). Ekstrakt łączono z hodowlą bakterii niechorobotwórczych, a nimi zakażano myszy. Liczono chore zwierzęta, a w krwi padłych sprawdzano obecność bakterii.
Próby kontrolne: same bakterie niechorobotwórcze → mysz żyje; bakterie niechorobotwórcze + ekstrakt bez enzymu → mysz ginie, we krwi bakterie chorobotwórcze.
Próby badawcze: + enzym trawiący białko → mysz ginie; + enzym trawiący RNA → mysz ginie; + enzym trawiący DNA → mysz żyje.
Wniosek: cechy przekazuje DNA — to on jest nośnikiem informacji genetycznej.
Alfred Hershey i Martha Chase, 1952, USAPytanie: która część bakteriofaga T2 wnika do bakterii i powoduje powstawanie nowych wirusów? Hipoteza: DNA jest nośnikiem informacji bakteriofagów.
Białkowy kapsyd znakowano siarką promieniotwórczą (35S), a DNA — fosforem promieniotwórczym (32P). Fagami zakażano bakterie. Fag wstrzykuje do bakterii DNA. Wytrząsanie odrywa puste kapsydy od bakterii, a wirowanie oddziela bakterie (osad) od roztworu z kapsydami. Na końcu mierzono promieniotwórczość.
Wynik: większość 35S była w roztworze z kapsydami, a większość 32P — w osadzie z bakteriami zawierającymi DNA faga.
Wniosek: informację genetyczną wirusów przekazuje DNA, nie białko.

Informacja genetyczna a kod genetyczny

Informacja genetyczna to treść zapisana w odcinkach DNA, czyli w genach. Dotyczy syntezy białek, od których zależą cechy organizmu. Kod genetyczny to sposób zapisu tej treści. Jego „alfabet” stanowią cztery litery — G, A, C oraz T (w DNA) lub U (w RNA) — oznaczające kolejne nukleotydy. Kolejność nukleotydów wyznacza kolejność aminokwasów w łańcuchu polipeptydowym, czyli strukturę pierwszorzędową białka.

Informacja zawarta w genie obejmuje więcej niż sam przepis na cząsteczkę:

Element informacjiPrzykład / znaczenie
budowa cząsteczkikolejność aminokwasów w białku lub nukleotydów w RNA
warunki wytwarzanianp. podwyższona temperatura otoczenia
miejsce docelowedokąd w komórce ma trafić cząsteczka, np. do błony komórkowej, do mitochondrium
rodzaj komórekw jakich komórkach ma powstawać, np. insulina — tylko w komórkach trzustki
czas obecnościjak długo cząsteczka ma istnieć, czyli jak szybko ma ulec degradacji
tempo wytwarzaniaile cząsteczek ma powstać w danym czasie

Wiązania w DNA — dwa różne typy

W cząsteczce DNA występują dwa rodzaje wiązań — nie myl ich.

WiązanieCo łączy
Fosfodiestrowe (3′,5′)kolejne nukleotydy wzdłuż jednej nici (reszta fosforanowa–cukier); tworzy trwały „szkielet” nici — występuje też w RNA
Wodorowezasady azotowe leżące naprzeciw siebie na dwóch niciach: A z T, G z C; spinają obie nici helisy

Para A–T ma zawsze 2 wiązania wodorowe, a G–C — zawsze 3. Wiązania wodorowe między niciami są rozrywane np. przed replikacją (robi to helikaza), a wiązania fosfodiestrowe łączą kolejne nukleotydy w ciągłą nić. Wewnątrz każdego nukleotydu działają jeszcze wiązanie N-glikozydowe (cukier–zasada) i estrowe (cukier–fosforan).

Reguła Chargaffa — jak liczyć zasady

Skoro w dwuniciowym DNA A zawsze łączy się z T, a G z C, to ich ilości (i procenty) są równe. Ta prawidłowość to reguła Chargaffa. Nie stosuje się jej do jednoniciowego DNA (ssDNA) niektórych wirusów.

ZasadaWynika z komplementarności
liczba A = liczba T%A = %T
liczba G = liczba C%G = %C
A + T + G + C= wszystkie nukleotydy (100%)

Przykłady z zadań:

1. 460 nukleotydów, w tym 65 z tyminą (T). Skoro A = T, to A = 65, więc A + T = 130. Zostaje 460 − 130 = 330 na G + C. Ponieważ G = C → C = 330 : 2 = 165.

2. C = 20% wszystkich nukleotydów. Wtedy G = 20% (bo G = C), razem G + C = 40%. Zostaje A + T = 60%, a że A = T → A = 30%.

3. A = 35% wszystkich nukleotydów. Wtedy T = 35%, razem A + T = 70%. Zostaje G + C = 30%, a że G = C → G = 15%.

4. 250 nukleotydów, w tym 75 z cytozyną. G = C = 75, więc G + C = 150. Na A + T zostaje 250 − 150 = 100, czyli T = 100 : 2 = 50.

5. Czy cząsteczka jest dwuniciowa? Fragment ma 200 nukleotydów, w tym 63 z G i 56 z A. Zakładamy dwuniciowość: wtedy C = 63 i T = 56. Suma wynosi 63 + 56 + 63 + 56 = 238, a nie 200. Założenie jest więc fałszywe: zasady nie mogą być w pełni komplementarne, czyli to DNA jednoniciowe.

Rodzaje RNA i ich role

W komórkach jest kilka rodzajów RNA. Różnią się liczbą i kolejnością nukleotydów, kształtem przestrzennym i funkcją. Wszystkie bezpośrednio lub pośrednio biorą udział w odczytywaniu informacji genetycznej. Najważniejszą funkcją RNA jest udział w ekspresji genów, czyli w odczytywaniu informacji zawartej w DNA. Główną rolę odgrywają tu mRNA, rRNA i tRNA.

RodzajGdzieBudowa i rola
mRNA (informacyjny, ang. messenger)wszystkie organizmyStanowi 4–5% RNA komórki. Jest jedynym RNA kodującym, bo niesie informację o budowie białek. Przenosi tę informację z miejsca przechowywania do miejsca syntezy białek (u eukariontów głównie z jądra do cytoplazmy). Tam łączy się z rybosomami i jest matrycą. Jest jednoniciowy i krótkotrwały; zwykle liczy 1000–2000 nukleotydów.
rRNA (rybosomowy, ang. ribosomal)wszystkie organizmyJest go w komórce najwięcej. Buduje rybosomy — kompleksy nukleoproteinowe syntetyzujące białka zgodnie z mRNA. Jedne cząsteczki pełnią funkcję budulcową, inne katalityczną (rybozymy). Przykład rybozymu: transferaza peptydylowa w dużej podjednostce, łącząca aminokwasy w białko. Rybosom ma dwie podjednostki, dużą i małą, które łączą się tylko na czas syntezy białka.
tRNA (transportujący, ang. transfer)wszystkie organizmyDostarcza aminokwasy (substraty syntezy białka) do rybosomów. Małe cząsteczki o długości 74–90 nukleotydów. Jedna cząsteczka rozpoznaje, wiąże i przenosi tylko jeden rodzaj aminokwasu. Aminokwas przyłącza się do końca 3′ z wolną grupą –OH, która tworzy wiązanie estrowe z grupą –COOH aminokwasu. Ma antykodon — trzy nukleotydy rozpoznające komplementarny kodon w mRNA.
snRNA (mały jądrowy)tylko eukariontyuczestniczy w dojrzewaniu mRNA
miRNA (mikroRNA)tylko eukariontyreguluje ekspresję genów przez degradację mRNA lub blokowanie translacji
siRNA (mały interferujący)tylko eukariontyreguluje ekspresję genów, m.in. przez degradację mRNA; jest jednym z elementów obrony komórki przed wirusami RNA

Podział ilościowy: RNA kodujący (mRNA) to 4–5% całości. RNA niekodujący (rRNA, tRNA, snRNA, siRNA, miRNA i inne rodzaje) to 95–96%. W mRNA brak fragmentów dwuniciowych. W rRNA i tRNA mogą one powstawać, gdy łączą się komplementarne nukleotydy tej samej nici (A z U, G z C). Te fragmenty decydują o kształcie przestrzennym cząsteczki.

Schemat cząsteczki tRNA w kształcie liścia koniczyny z aminokwasem na końcu 3′ i antykodonem w dolnej pętli.
Cząsteczka tRNA w kształcie liścia koniczyny. Aminokwas (zielona kulka) przyłącza się do końca 3′ — u góry po prawej. W ramionach komplementarne nukleotydy tej samej nici łączą się wiązaniami wodorowymi (kreski). W dolnej pętli leży antykodon: trzy nukleotydy (pomarańczowe), które rozpoznają komplementarny kodon w mRNA.

Gdzie w komórce jest RNA

  • Eukarionty: RNA jest w jądrze, cytozolu i organellach półautonomicznych (mitochondriach i chloroplastach). W jądrze powstają wszystkie rodzaje RNA, przy czym rRNA tworzy się w jąderku. Wszystkie RNA oprócz rRNA przechodzą przez pory jądrowe do cytozolu. rRNA łączy się w jąderku z białkami w podjednostki rybosomów, które także trafiają do cytozolu. Niektóre cząsteczki, np. snRNA, wędrują w obie strony.
  • W mitochondriach i chloroplastach powstają własne mRNA, tRNA i rRNA (dla rybosomów organellowych). Służą do ekspresji genów genomu mitochondrialnego i chloroplastowego.
  • Prokarionty nie mają jądra ani innych organelli, więc całe ich RNA jest w cytoplazmie.
  • Ilość RNA w komórce się zmienia, ale zawsze utrzymuje się równowaga między syntezą nowych cząsteczek a rozkładem niepotrzebnych.

RNA jako materiał genetyczny

  • Wiroidy to pasożyty roślin. Ich RNA jest jednoniciowy, zamknięty (kolisty) i liczy kilkaset nukleotydów. Ma fragmenty dwuniciowe utworzone przez komplementarne nukleotydy tej samej nici.
  • Wirusy RNA mają RNA jednoniciowe (ssRNA) lub dwuniciowe (dsRNA). Należy do nich większość wirusów atakujących rośliny, np. wirus mozaiki tytoniu. Należą też niektóre wirusy zwierzęce, np. wirusy grypy, HIV i SARS-CoV-2. Wirus grypy ma osłonkę lipidową, pod nią kapsyd, a w środku RNA.

Organizacja DNA w genomie

Nić DNA jest bardzo długa, więc musi zostać upakowana: helisa → nawinięcie na białka (histony) = nukleosom → chromatyna → chromosom. Dzięki temu metry DNA mieszczą się w jądrze. U człowieka DNA znajduje się głównie w jądrze, a niewielka ilość poza nim — w mitochondriach (u roślin także w chloroplastach).

Łącznie DNA w jądrze komórki człowieka ma ok. 2 m długości, a jądro ma średnicę zaledwie 5–8 µm. Zmieszczenie DNA umożliwia wiązanie go z białkami histonowymi. DNA związane z białkami to chromatyna. Upakowanie przebiega w kilku stopniach:

#StopieńOpis
1wolna helisa DNADNA jest wolne (nieupakowane) tylko podczas replikacji
2nukleosomOdcinek DNA owija się wokół rdzenia z czterech par zasadowych białek histonowych. Jeden histon łącznikowy działa jak klamra: nie pozwala nukleosomowi się rozpaść ani rozwinąć. Nukleosomy oddziela krótki DNA łącznikowy. Taka „nić nukleosomów” skraca DNA ok. 7 razy.
3włókno 30 nm (solenoid)Między podziałami nić nukleosomów zwija się w helisę, a nukleosomy łączą się dzięki histonom i białkom niehistonowym. DNA zajmuje wtedy 40 razy mniej miejsca niż przed upakowaniem.
4pętlena początku podziału włókna chromatyny układają się w pętle utrzymywane przez łączące je białka
5włókna 300 nmpętle zwijają się spiralnie
6chromosom skondensowanyPrzypomina krótką pałeczkę. Przy największej kondensacji DNA jest krótsze ok. 9 tys. razy.
7chromosom w dzielącej się komórcedwie jednakowe cząsteczki DNA, czyli chromatydy siostrzane, połączone w centromerze; po obu stronach centromeru leżą ramiona chromosomu
Schemat kolejnych stopni upakowania DNA: od helisy przez nukleosomy, włókno 30 nm, pętle i grube włókno do chromosomu z dwiema chromatydami.
Stopnie upakowania DNA (od lewej): helisa DNA → nukleosomy, czyli DNA nawinięte na białka histonowe (niebieskie) → włókno 30 nm → pętle utrzymywane przez białka → pętle zwinięte spiralnie (włókno 300 nm) → chromosom w dzielącej się komórce: dwie chromatydy siostrzane połączone w centromerze (pomarańczowy).

Chromatyna między podziałami. W tym czasie (poza fazą S) chromatyna ma postać mniej lub bardziej upakowanych włókien 30 nm. Występuje w dwóch postaciach:

  • euchromatyna — luźno upakowana. Uważa się, że zawiera geny aktywne; przy odczytywaniu informacji rozluźnia się dodatkowo. W obrazie spod TEM jest rozproszona po jądrze.
  • heterochromatyna — ściśle upakowana. Uważa się, że zawiera geny nieaktywne i większość pozagenowego DNA. Leży zwykle pod otoczką jądrową i wokół jąderka.

Chromatyna w czasie podziału. Chromosomy widać w mikroskopie optycznym już w profazie, a najsilniej skondensowane są w metafazie. Ich wyodrębnienie warunkuje dokładny rozdział materiału genetycznego do komórek potomnych. W regulacji stopnia upakowania chromatyny uczestniczy niekodujący RNA.

Replikacja DNA — powstają dwie takie same cząsteczki

Podczas replikacji (faza S) nici helisy rozplatają się, a na każdej z nich — zgodnie z komplementarnością — dobudowywana jest nić nowa. Replikacja jest półzachowawcza (semikonserwatywna): każda z dwóch cząsteczek potomnych ma jedną nić starą (matrycową) i jedną nowo powstałą.

Znaczenie. Replikacja podwaja ilość DNA w komórce i daje dwie identyczne kopie materiału genetycznego. W podziale (faza M) trafiają one do komórek potomnych. Dlatego replikacja jest podstawą przekazywania informacji genetycznej komórkom i organizmom potomnym. Zachodzi przed każdym podziałem komórki, co pozwala organizmom rosnąć i się rozmnażać. To proces anaboliczny katalizowany przez enzymy. Udział biorą DNA macierzysty (matryca) i wolne nukleotydy (substraty).

Przykład. Na matrycy o sekwencji G T A A T G T A G T A A powstaje nić komplementarna. Podstawiamy A↔T, G↔C (to DNA, więc T, nie U):

Nić matrycowa (stara)Nić nowa
G T A A T G T A G T A AC A T T A C A T C A T T

Uwaga: wynik z U (np. CAUUACAUCAUU) byłby błędny — uracyl występuje w RNA, a nie w DNA.

EnzymRola w replikacji
helikaza DNArozplata helisę, rozrywając wiązania wodorowe między niciami
prymaza (polimeraza RNA)na matrycy DNA tworzy startery — krótkie odcinki RNA (ok. 10 nukleotydów), syntetyzowane w kierunku 5′ → 3′
polimerazy DNABudują nową nić na matrycy starej, zawsze w kierunku 5′ → 3′, na matrycy o polarności 3′ → 5′. Same nie zaczynają syntezy — tylko dokładają nukleotydy do końca 3′ istniejącego łańcucha, np. startera.
ligazałączy nowe fragmenty nici w jeden ciągły łańcuch

Przebieg u pałeczki okrężnicy (Escherichia coli), gdzie mechanizm poznano najlepiej. E. coli ma pięć polimeraz DNA (I–V); główną rolę grają III i I. Chromosom ma postać kolistego DNA o długości 4,6 mln pz. Kopiuje się przed każdym podziałem w niecałe 40 minut, z jednego miejsca inicjacji.

  1. Inicjacja. Białko regulatorowe przyłącza się do miejsca inicjacji replikacji, czyli miejsca ori (ang. origin of replication). Na krótkim odcinku helisa się rozplata i powstaje oczko replikacyjne. Jego boki mają kształt litery Y — to widełki replikacyjne. Dołączają się tu kolejne białka potrzebne w następnym etapie.
  2. Elongacja. Helikazy rozrywają wiązania wodorowe. Widełki rozchodzą się w dwie przeciwne strony, a oczko rośnie — replikacja jest dwukierunkowa. Prymaza tworzy startery na obu niciach, a do ich końców 3′ przyłącza się polimeraza III i buduje nić komplementarną. Replikowany odcinek DNA to replikon.
    Nici są antyrównoległe, a synteza idzie tylko 5′ → 3′, więc obu nowych nici nie da się budować w sposób ciągły w stronę widełek:
    • nić wiodąca rośnie w sposób ciągły w stronę widełek; starter wstawia się na niej tylko raz;
    • nić opóźniona rośnie w przeciwną stronę, z wielu kolejnych startów. Startery wstawiane są mniej więcej co 1000 nukleotydów, a powstają krótkie fragmenty Okazaki, nazwane od odkrywcy.
    Polimeraza I wycina startery i wypełnia luki nukleotydami DNA, a ligaza łączy fragmenty Okazaki. Wydłużanie trwa, aż skopiowana zostanie cała cząsteczka.
  3. Terminacja. Koniec wyznaczają sekwencje terminacyjne, leżące u E. coli naprzeciw miejsca ori. Tam białka replikacyjne odłączają się od DNA i powstają dwie identyczne cząsteczki.

Replisom to duży kompleks białkowy powstający w rejonie widełek. Tworzą go prymosom (mniejszy kompleks, m.in. helikaza i prymaza) oraz polimeraza III. Połączenie enzymów pozwala im działać precyzyjnie i zgodnie. Helikaza rozplata helisę, prymaza wstawia startery, a tuż za nią polimeraza III buduje DNA od końców 3′ starterów. Replisom E. coli pracuje z szybkością ok. 2000 pz/s.

Schemat oczka replikacyjnego: miejsce ori w środku, dwoje widełek, nici wiodące i opóźnione z fragmentami Okazaki oraz enzymy replikacji.
Oczko replikacyjne. Replikacja zaczyna się w miejscu ori (kropka w środku) i biegnie w obie strony, do dwóch widełek. Ciemnozielone są nici stare (matrycowe), pomarańczowe — nowe. Przy każdych widełkach jedna nowa nić rośnie w sposób ciągły (nić wiodąca), a druga powstaje z fragmentów Okazaki, z których każdy zaczyna się starterem RNA (czerwony) — to nić opóźniona. Dlatego nić ciągła jest raz u góry, a raz na dole. Enzymy: helikaza (niebieski pierścień), prymaza (fioletowa), polimeraza DNA (żółta), ligaza łącząca fragmenty (szara).
CechaProkarionty (E. coli)Eukarionty
kształt chromosomukolistyliniowy
miejsca orijedno; synteza w obu kierunkachwiele w jednym chromosomie, więc wiele oczek naraz; synteza w obu kierunkach
polimerazy DNA5 (I–V); główne III i Ico najmniej 9, oznaczane literami greckimi. Główne to α i δ. Polimeraza α ma aktywność prymazy: tworzy startery RNA i wydłuża je o ok. 20 nukleotydów DNA. Dalej syntezę prowadzi polimeraza δ.
zakończeniesekwencja terminacyjna naprzeciw oriSłabo poznane. Przypuszcza się, że widełki spotykają się w przypadkowych miejscach i tam odłączają się białka. Wszystkie oczka muszą się połączyć.
ilość DNA4,6 mln pzkomórka somatyczna człowieka — ok. 3 mld pz; wiele miejsc startu znacznie skraca czas replikacji

Replikacja u eukariontów jest znacznie bardziej złożona, choć ogólny przebieg jest podobny. Największe różnice dotyczą inicjacji i terminacji.

Końce chromosomów — telomery. Liniowe DNA eukariontów skraca się przy każdej replikacji. Po usunięciu ostatniego startera na końcu nici opóźnionej polimeraza nie może uzupełnić tego fragmentu. Końce odbudowuje telomeraza: dokłada nukleotydy do końca matrycy nici opóźnionej. Powstają sekwencje telomerowe (telomery) — wiele razy powtórzone krótkie odcinki o tej samej kolejności zasad. Telomeraza działa w komórkach embrionalnych, linii płciowej i macierzystych. W większości dojrzałych komórek jest nieaktywna, więc ich telomery stopniowo się skracają. Tracone są jednak wcześniej utworzone telomery, a nie sekwencje kodujące genów. Telomeraza nie działa też w komórkach starzejących się, w których podziały i replikacja są zahamowane. W komórkach nowotworowych zwykle ulega ponownej aktywacji.

Korekta błędów. Polimeraza wstawia błędny nukleotyd mniej więcej raz na 100 tys. poprawnych. Kontroluje jednak swoją pracę:

  1. przyłącza nukleotyd (czasem niewłaściwy);
  2. sprawdza parę z nicią matrycową i usuwa błędny nukleotyd;
  3. wstawia właściwy;
  4. kontynuuje syntezę.

Dzięki temu zostaje ok. 1 błąd na 100 mln nukleotydów.

Regulacja. Replikacja zachodzi tylko raz przed każdym podziałem. Białka startujące odłączają się od DNA zaraz po utworzeniu oczka, co zapobiega powstawaniu wielu kopii. W niekorzystnych warunkach replikacja jest wstrzymywana. Przy uszkodzeniu DNA (np. przez promieniowanie jonizujące) powstają białka naprawcze. Zatrzymują one replikację do czasu usunięcia uszkodzeń, by nie powstały wadliwe cząsteczki DNA.

Dodatkowo: replikacja RNA u wirusów

Niektóre wirusy RNA, m.in. koronawirusy, powielają swój RNA. Robi to polimeraza RNA zależna od RNA, kodowana przez genom wirusa. Uproszczony cykl koronawirusa:

  1. adsorpcja — glikoproteiny osłonki rozpoznają receptory na powierzchni komórki i wiążą się z nimi;
  2. wnikanie — kapsyd z materiałem genetycznym wchodzi do cytoplazmy i rozpada się, uwalniając ssRNA;
  3. replikacja RNA — polimeraza RNA powiela genom (przez dsRNA) i powstają nowe genomy ssRNA;
  4. translacja — białka wirusa powstają na rybosomach gospodarza (na podstawie mRNA);
  5. składanie — z elementów powstają nowe wirusy;
  6. uwolnienie — wirus opuszcza komórkę.

Jak udowodniono semikonserwatywność — Meselson i Stahl (1958, USA)

ModelCząsteczki potomnePrzewidywania (wirowanie)
konserwatywny (zachowawczy)jedna ma obie nici stare, druga obie nowepo 1. rundzie: dwa pasma tej samej grubości — u góry (14N–14N) i u dołu (15N–15N); po 2. rundzie: grubsze u góry, cieńsze u dołu
semikonserwatywny (półzachowawczy)każda ma jedną nić starą i jedną nowąpo 1. rundzie: jedno pasmo pośrodku (14N–15N); po 2. rundzie: dwa pasma tej samej grubości — u góry i pośrodku
dyspersyjny (przypadkowy)każda składa się z fragmentów nici starej i nowejpo 1. rundzie: jedno cieńsze pasmo pośrodku; po 2. rundzie: jedno grubsze pasmo pośrodku

Problem: który z trzech modeli opisuje replikację? Hipoteza: model semikonserwatywny.

Metoda. Bakterie hodowano na podłożu z ciężkim izotopem azotu (15N), a potem przenoszono na podłoże z lekkim (14N). Nowe nici wbudowywały azot dostępny w podłożu. Stare nici zawierały więc zawsze 15N, a nowe — zawsze 14N. Badano DNA po pierwszym i drugim podziale.

Cząsteczki rozdzielano wirowaniem w gradiencie gęstości chlorku cezu (CsCl). Gęstość stężonego roztworu rośnie ku dnu probówki. Każda cząsteczka DNA zatrzymuje się tam, gdzie jej gęstość równa się gęstości roztworu, i tworzy pasmo. DNA z 15N jest gęstsze, więc układa się bliżej dna.

Wynik: po 1. rundzie jedno pasmo pośrodku, po 2. rundzie dwa pasma — u góry i pośrodku. Próby kontrolne: hodowla stale na 14N daje pasma tylko u góry, a stale na 15N — tylko u dołu.

Wniosek: wynik zgadza się z modelem semikonserwatywnym, więc replikacja DNA jest semikonserwatywna.

Geny — budowa

U wszystkich organizmów i większości wirusów gen to fragment DNA niosący informację potrzebną do wytworzenia białka lub RNA.

  • Geny kodujące białka. Jeden gen koduje jeden łańcuch polipeptydowy. Jeśli białko ma kilka różnych łańcuchów (podjednostek), każdy jest zapisany w innym genie.
  • Geny kodujące RNA kodują wszystkie rodzaje RNA z wyjątkiem mRNA.

Każdy gen ma części strukturalne i części regulatorowe. Części regulatorowe uczestniczą w regulacji odczytywania informacji. U eukariontów część strukturalna jest podzielona na:

  • eksony — kodują kolejność aminokwasów w białku lub nukleotydów w RNA;
  • introny — nie pełnią funkcji kodujących.

Introny i części regulatorowe to sekwencje niekodujące genu. Ich udział zależy od organizmu. U prostych organizmów, np. drożdży, stanowią niewielką część genu. U bardziej złożonych, np. kręgowców, są znacznie dłuższe od sekwencji kodujących i mogą przekraczać 90% genu.

Typ genuBudowaGdzie głównie
gen ciągłybrak intronów; środek genu to wyłącznie sekwencje kodujące, otoczone częściami regulatorowymiprokarionty
gen nieciągłyeksony przeplatane intronami, otoczone częściami regulatorowymieukarionty

Genom — komplet informacji genetycznej

Genom to cała informacja genetyczna komórki zapisana w DNA. Tym słowem nazywa się też materiał genetyczny wirusów (RNA lub DNA) i wiroidów (RNA). Genom tworzą geny oraz odcinki DNA między nimi, czyli pozagenowy DNA. Liczba genów i ilość pozagenowego DNA są cechami gatunkowymi. U człowieka pozagenowy DNA to ok. 70% genomu.

GenyDNA pozagenowy
eksonyintronyczęści regulatorowesekwencje powtarzalnepseudogenypozostałe sekwencje
  • Sekwencje powtarzalne to odcinki o długości nawet 10 tys. pz z powtarzającymi się sekwencjami nukleotydów. Występują m.in. w centromerach (sekwencje centromerowe) i telomerach (sekwencje telomerowe). Ich funkcje są wciąż intensywnie badane.
  • Pseudogeny to fragmenty podobne do genów. Uważa się, że kiedyś były czynnymi genami.
  • Liczba genów nie zależy od wielkości genomu. U organizmów o złożonej budowie dużą część genomu zajmuje pozagenowy DNA, a geny mają introny, co dodatkowo powiększa genom.

Genom komórki prokariotycznej

  • Chromosom bakteryjny to zwykle jedna cząsteczka DNA o wielkości kilku mln pz, najczęściej kolista. U niektórych bakterii chromosom tworzy więcej cząsteczek, np. u przecinkowca cholery (Vibrio cholerae) dwie. Chromosom leży w obszarze cytozolu zwanym nukleoidem. Mieści się tam dzięki białkom, które tworzą centralny rdzeń, z którego promieniście wychodzi 40–50 skręconych pętli DNA.
  • Plazmidy to znacznie mniejsze, najczęściej koliste cząsteczki DNA. Ich geny dotyczą cech przydatnych, ale nie zawsze niezbędnych, np. oporności na antybiotyki. Bakteria może mieć jeden lub wiele plazmidów, a każdy nawet w kilkudziesięciu kopiach. Plazmidy replikują się niezależnie od chromosomu. Dlatego część badaczy uważa, że nie należą do genomu prokariotycznego.
PlazmidWielkośćBakteriaCecha
Col E16,6 tys. pzpałeczka okrężnicy (Escherichia coli)wytwarzanie toksyny zabijającej inne bakterie
RP460 tys. pzpałeczka ropy błękitnej (Pseudomonas aeruginosa)oporność na tetracyklinę
Ti206 tys. pzAgrobacterium tumefacienswywoływanie guzowatych narośli na korzeniach roślin dwuliściennych

Ciekawostka: najmniejsze genomy bakterii mają pasożyty i symbionty. Rekordzistka Tremblaya princeps żyje w symbiozie z owadami z rzędu pluskwiaków. Jej genom ma 140 tys. pz i tylko 120 genów.

Genom komórki eukariotycznej

  • Genomy eukariontów są bardzo duże: od kilku mln do nawet 100 mld pz. Wielkość wiąże się przede wszystkim ze złożonością organizmu. Najmniejsze mają proste eukarionty, m.in. grzyby, a największe — zaawansowane ewolucyjnie kręgowce i rośliny okrytozalążkowe.
  • Genom jądrowy to przeważająca część genomu. Tworzą go chromosomy eukariotyczne, czyli długie liniowe cząsteczki DNA związane z histonami. Liczba chromosomów to cecha gatunku — najczęściej mieści się w przedziale od kilku do kilkudziesięciu; w komórkach somatycznych człowieka jest ich 46. Genom jądrowy koduje niemal wszystkie białka i cząsteczki RNA komórki.
  • Genom organellowy obejmuje genom mitochondrialny i chloroplastowy. Replikuje się niezależnie od jądrowego. Przypomina genom prokariotyczny: zwykle tworzą go koliste cząsteczki DNA z białkami niehistonowymi, obecne w wielu kopiach (np. 10–100 cząsteczek w mitochondrium). Jego geny kodują tylko część białek i RNA potrzebnych organellum; resztę koduje genom jądrowy. Dlatego mitochondria i chloroplasty to organella półautonomiczne.
  • Niektóre eukarionty, np. drożdże Saccharomyces cerevisiae, mają też plazmidy. Ich geny pozwalają np. syntetyzować nukleotydy, gdy brakuje ich w środowisku.
  • W komórce zwierzęcej genom leży w jądrze i mitochondriach, a w roślinnej — w jądrze, mitochondriach i chloroplastach.
  • Genom mitochondrialny człowieka to kolista cząsteczka DNA o długości 16 569 pz z 37 genami. Jest mały, bo jego geny nie mają intronów, a w jednym miejscu dwa geny zachodzą na siebie. Koduje tRNA i rRNA mitochondriów oraz część białek łańcucha oddechowego.
OrganizmWielkość genomu jądrowego [mln pz]Szacowana liczba genów
drożdże Saccharomyces cerevisiae12,16100
ryż46640 000
nicień Caenorhabditis elegans9719 000
muszka owocowa18014 000
kura domowa120020 000
człowiek320020 000

Tabela pokazuje, że liczba genów nie rośnie razem z wielkością genomu: ryż ma więcej genów niż człowiek.

Haplonty, diplonty i ilość DNA w cyklu komórkowym

Haplonty (m.in. bakterie i niektóre protisty) mają genom pojedynczy (haploidalny, 1n). Diplonty (większość eukariontów, m.in. człowiek) mają genom podwójny (diploidalny, 2n). Bakteria przed replikacją ma jedną kopię genomu (1n, 1c), a po replikacji dwie (1n, 2c).

Komórki człowiekaZmiany
linii somatycznej (budują ciało, 2n, dzielą się mitotycznie)2n, 2c (jedna kopia genomu, łącznie 3200 mln pz) → replikacja → 2n, 4c (dwie kopie, 6400 mln pz) → mitoza → dwie komórki 2n, 2c (po 3200 mln pz)
linii płciowej (tworzą gamety, dzielą się mejotycznie, z redukcją 2n → 1n)2n, 2c (3200 mln pz) → replikacja → 2n, 4c (6400 mln pz) → I i II podział mejotyczny → cztery komórki 1n, 1c (pojedynczy genom, 1600 mln pz)

Genomy wirusów

Genomy wirusów to DNA lub RNA. Liczba genów jest różna: od 3 u najprostszych wirusów do ponad 200 u wirusów o złożonej budowie. Wirusom wystarcza niewiele genów, bo korzystają z informacji genetycznej zakażonej komórki (gospodarza). Ich geny mogą zachodzić na siebie, co pozwala ciaśniej upakować informację. Takie geny mają wspólne sekwencje nukleotydów, ale kodują różne białka.

Przykład: genom bakteriofaga ΦX174 to kolista, jednoniciowa cząsteczka DNA o długości 5386 nukleotydów (ok. 5,4 tys.). Ma 11 genów (A–H), z których część zachodzi na siebie (A i B, D i E). Pozagenowy DNA to tylko 5% genomu.

Rodzaj kwasuLiczba niciStruktura
RNA lub DNAjednoniciowy, dwuniciowy lub jednoniciowy z fragmentami dwuniciowymiliniowy lub kolisty

Co różni DNA organizmów; gdzie powstają białka

DNA myszy i kota (i wszystkich organizmów) jest zbudowane z tych samych 4 zasad, takich samych nukleotydów i takich samych wiązań. Pod względem chemicznym różni je sekwencja (kolejność) zasad azotowych — i to ona niesie inną informację genetyczną. Gatunki różnią się też wielkością genomu, liczbą genów i liczbą chromosomów.

Informacja z DNA jest realizowana w białkach. Białka powstają podczas translacji na rybosomach (zbudowanych m.in. z rRNA) — to one bezpośrednio uczestniczą w łączeniu aminokwasów. Szczegóły w lekcji 12.3.

Sprawdź się

1. Cytozyna stanowi 18% zasad dwuniciowego DNA. Ile procent stanowi adenina? Rozwiązanie: G = 18%, G + C = 36%, A + T = 64%, więc A = 32%.

2. Zapisz nić komplementarną do 5′-GCCATCATCCTTACC-3′. Rozwiązanie: 3′-CGGTAGTAGGAATGG-5′.

3. Podaj dwie różnice między replikacją u prokariontów i eukariontów. Przykładowo: jedno miejsce ori kontra wiele; chromosom kolisty kontra liniowy (patrz tabela w części o replikacji).

⚠️ Pułapki: wiązania i obliczenia
  • Dwa wiązania: fosfodiestrowe łączą nukleotydy wzdłuż nici, wodorowe łączą zasady między nićmi. Pytanie „co łączy nukleotydy w łańcuchu?” → fosfodiestrowe.
  • Chargaff: A = T i G = C. Najpierw policz parę, którą znasz, potem odejmij od całości i podziel przez 2. Reguła dotyczy tylko DNA dwuniciowego.
  • Replikacja półzachowawcza — każda cząsteczka potomna ma 1 nić starą + 1 nową (nie „dwie stare i dwie nowe”).
  • Nić nowa w DNA ma T, nie U — U pojawia się dopiero w RNA (transkrypcja).
  • Organizmy różni kolejność zasad, a nie rodzaj zasad czy budowa nukleotydów.
⚠️ Pułapki konkursowe — tu najczęściej tracisz punkty
  • A łączy się z T, G z C — nie „A z G”. Zawsze purynę z pirymidyną.
  • W RNA jest uracyl (U), nie tymina; RNA jest zwykle jednoniciowe (fragmenty dwuniciowe bywają, a dsRNA mają m.in. niektóre wirusy).
  • Deoksyryboza w DNA, ryboza w RNA — nie mylić cukrów.
  • Kolejność upakowania: helisa → nukleosom → chromatyna → chromosom.
  • DNA jest też poza jądrem — w mitochondriach (i chloroplastach roślin).
⚠️ Pułapki: replikacja, RNA, genomy
  • Polimeraza DNA nie zaczyna sama — potrzebuje startera RNA od prymazy i dokłada nukleotydy tylko do końca 3′. Synteza zawsze biegnie 5′ → 3′.
  • Fragmenty Okazaki powstają na nici opóźnionej, a nie wiodącej. Starter na nici wiodącej wstawia się raz.
  • U E. coli polimeraza III buduje nici, a polimeraza I usuwa startery i wypełnia luki. U eukariontów główne są α i δ.
  • Nukleosom to 4 pary histonów (8 cząsteczek) plus nawinięty DNA. Histon łącznikowy jest osobnym, dodatkowym białkiem.
  • Kodującym RNA jest tylko mRNA (4–5%). Geny kodujące RNA odpowiadają za wszystkie rodzaje RNA poza mRNA.
  • snRNA, miRNA i siRNA występują tylko u eukariontów; mRNA, rRNA i tRNA — u wszystkich organizmów.
  • Genom organellowy tworzą zwykle koliste cząsteczki DNA z białkami niehistonowymi, a jądrowy — liniowe cząsteczki z histonami.
  • Większy genom nie oznacza więcej genów (ryż 40 000 genów, człowiek ok. 20 000).

Mini-powtórka — zapamiętaj 5 rzeczy

  1. Nukleotyd = cukier + reszta fosforanowa + zasada azotowa.
  2. Komplementarność: A–T, G–C (wiązania wodorowe), nici antyrównoległe.
  3. RNA: zwykle jedna nić, ryboza, uracyl zamiast tyminy; mRNA, tRNA, rRNA.
  4. Upakowanie: helisa → nukleosom → chromatyna → chromosom.
  5. Replikacja jest semikonserwatywna: każda z dwóch nowych cząsteczek DNA ma jedną nić starą (matrycową) i jedną nową — dowiodło tego doświadczenie Meselsona i Stahla.
Pliki ćwiczeń
Budowa DNA i RNA. Organizacja w genomie — notatka.pdf
Rozmiar: 398,15 KB
Budowa DNA i RNA. Organizacja w genomie — zadania konkursowe.pdf
Rozmiar: 3,59 MB
0% Zakończ
Przewijanie do góry
×Pamięciówka